Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型冠心病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显露现肝蛋白质致病到显露现1M-肾病针灸病症的方面率在幼儿时期就有不太好的刻画，多个肝蛋白质致病非典型的幼儿当中有70%在血清反转后10年内患上肾病，而随访15年的幼儿这一比率减小到84%。比起之下，占针灸1M-肾病一半以上的M-1M-肾病的复发前提还没有人想得到适当的深入研究。

愈加多的人开始可用分期操纵系统来定义1M-肾病的方面：个本体在显露现多种肝蛋白质致病时转回第1阶段性，显露现血糖持续性时转回第2阶段性，显露现病症时转回第3阶段性。一些多发肝蛋白质致病非典型的个本体，在1期和2期，方面较较慢，并发展为复发的1M-肾病。我们之前刻画了一分组在首次检测到多种肝蛋白质致病检测后仅仅10年无肾病的以致于较慢方面者，这分组病征总数少，但理论上特征更加说明。随后，我们发现肝蛋白质自身复合物特异性CD8+T蛋白质中间体在方面平稳的病征当中理论上不存在，但在近期复发和依然存在的肾病病征当中很容易检测到。这或许说明了，与方面病征比起，这些病征致病中间体的调节强化。

早期深入研究说明了，尽管调节性T蛋白质(Treg)数量正常，但肾病病征存在一些功用不足之处，其当中都有对IL-2的中间体能力降低。此外，肾病病征当中的振荡CD4+T蛋白质或许对调节突显抵抗性，表现为振荡T蛋白质的诱发减慢，人为产生的Treg和本胃产生的诱导Treg，以及复合物经历的CD4+T蛋白质当中IL-2中间体减慢。本深入研究的目的是刻画了CD4+调节性T蛋白质(Treg)在一小群以致于平稳方面者当中的理论上特征，他们的半数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX深入研究是一项以成年人为基础的纵向深入研究，在21岁请注意确诊的病征亲族当中检查1M-肾病的危险性原因。我们之前刻画了依然平稳方面者的理论上特征，他们依然多重肝蛋白质致病非典型高达10年，但没有人显露现肾病的针灸病症，较慢性或非顺利性虐待致病。随后，10名继续依然无肾病并愿意提供大量血液检测的平稳方面者纳入T和B蛋白质功用深入研究。在目前的深入研究当中，8名较慢方面者(SP分组)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝蛋白质致病非典型。所有的参与者都所处1M-肾病方面的1期，尽管一些人随后失去了肝蛋白质致病对某些复合物的非典型中间体，然而，一名病征已经所处2期仅仅6年，但没有人显露现针灸病症，一名病征被确诊为肾病，该受试者72岁，在野外试验检测时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究当中对该供本体顺利进行了单独审计。分离出来外周血单个核蛋白质(PBMCs)，采用多参数流式蛋白质精和T蛋白质诱发试验审计供本体当中Treg的基频、表M-和功用。可用FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、比如说和复归)顺利进行无统筹聚类深入研究，审计Treg表M-。

结果：与生活品质供本体比起，来自较慢方面本体的梦境CD4+T蛋白质的统筹聚类揭示，作用于的梦境CD4+ Treg基频减小，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)强调减小有关。一名HbA1c上升的病征与方面平稳者和最简单的依此分组比起，Treg谱有所各不相同。功用深入研究说明了，与生活品质供本体比起，来自平稳方面本体的Treg特异性的CD4+振荡T蛋白质诱发明显受到破坏。表现为对振荡CD4+T蛋白质CD25和CD134强调的诱发减小。

所示1 深入的表M-深入研究揭示，CD4+Treg甲M-在较慢方面队列当中减小。由FlowSOM聚合的Treg室，聚集在来自所有供本体的活CD4+CD45RA -蛋白质上。根据标明物强调解剖显露10个元簇:梦境T蛋白质_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T蛋白质;HLA-DR + GITR +梦境T蛋白质;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)可用9个各不相同Treg标明聚合的10个元簇的MST。每个键值代表人一个坦克部队(100个坦克部队)，更大的元坦克部队(10个元坦克部队)在键值分组周遭手工。每个键值当中的碗所示透露单个标明的强调高级别。(b)每个元聚类的热所示，以揭示既有标明强调。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)聚合所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的大块。(e-l)相较原子量为每个metacluster箱线或所示(原子量> 0.05%)确认为HD和SP分组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T蛋白质(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T蛋白质(l)。粉红色边框代表人**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon选取符号秩检测。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 可用CITRUS的预测模M-推测，Treg基频的减小是方面平稳的徽章。国际标准除此以外(a - f)和柑橘深入研究(g-k)较为SP参与者和最简单的HD参与者在CD4+CD45RA−T蛋白质上的差异。(a)表M-CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群本体的代表人性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3掺入，然后通过HLA-DR和GITR强调顺利进行分离出来，实时FlowSOM群本体。(b) HD(黑点)和SP(杂色)分组以及供本体SP 606(粉红色)当中CD25+ cd127的基频统计所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外子集的箱线或所示;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调强度着色，箭头突显露的簇被识别为SP和HD队列之间的各不相同。(j)箱线或所示揭示了在SP(杂色)和HD(灰点)分组当中，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相较原子量(比率)。(k)直方所示揭示每个簇的表M-(粉红色)和Treg标明相较强调与时代背景强调(紫色);上列，内核Treg_3;下面动身，内核Treg_4。时代背景与所有其他簇当中标明的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon选取符号秩检测

所示3 与生活品质献血者比起，方面平稳者梦境treg的GITR减小。每个梦境CD4+T蛋白质元簇(梦境T蛋白质_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T蛋白质;HLA-DR + GITR +梦境T蛋白质;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个强调标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的强调热所示(sp606不都有在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR强调串联，揭示直方所示(c)和统计所示(d)。Wilcoxon选取符号秩和检测，p< 0.07(粉红色)所有供本体都有，p< 0.05(紫色)供本体SP 606和最简单的HD不都有在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR强调，从国际标准除此以外，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(粉红色)串联，揭示直方所示(e)和统计所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon选取符号秩检测

所示4 来自平稳方面的CD4+ treg蛋白质操纵振荡CD4+T蛋白质的能力降低。SP分组用紫色的线或和边框透露，HD分组用银色的线或和边框透露，粉红色的线或/边框透露供本体sp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质顺利进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被标明为CFSE, Treg按观察的比率硫酸铜。用抗CD3 /28微珠酪氨酸蛋白质，培训3天后顺利进行流式蛋白质精检测。(a-d)与CD4+接收者者相较其所的treg培训(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培训。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE诱发倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发倍数。可用非典型依此(作用于的组织起来蛋白质都有treg)计算出来诱发倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

所示5 振荡CD4+T蛋白质对平稳方面的T蛋白质酪氨酸的诱发更敏感。SP分组用紫色的线或和边框透露，HD分组用银色的线或和边框透露，粉红色的线或/边框透露供本体sp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质顺利进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel标明，treg按观察的比率硫酸铜。用抗CD3 /28微珠酪氨酸蛋白质，培训3天后顺利进行流式蛋白质精(CD25反染)和蛋白质因子深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同培训。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE诱发百份(b)。(c,d) CD25诱发百份(c)和CD134诱发百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训当中的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

得出结论：我们得显露的得出结论是，来自平稳方面子的酪氨酸梦境CD4+Treg在GITR强调当中想得到了扩展和丰富，强调了全面性深入研究Treg在1M-肾病风险个本体当中的异质性的必要性。

原意显露处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28