Diabetologia：激活但功能损毁的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次注意到去甲自身血清到注意到1型式哮喘临床研究病症的成效所部在幼儿时期就有比较好的所述，多个去甲自身血清特征性的幼儿中所有70%在血清转成后10将近患上哮喘，而随访15年的幼儿这一比例上升到84%。相比于之下，占临床研究1型式哮喘一半以上的型式1型式哮喘的胃癌机制还不会给予可不有的数据归纳。

越来越多的人开始可用分期系统来定义1型式哮喘的成效：幼体在注意到多种去甲自身血清时踏入第1阶段性，注意到血糖反常时踏入第2阶段性，注意到病症时踏入第3阶段性。一些多发去甲自身血清特征性的幼体，在1期和2期，成效较慢，并发展为胃癌的1型式哮喘。我们以后所述了一个大在首次样品到多种去甲自身血清抽取后至较少10年无哮喘的快得多成效者，这第三组病症人数较少，但形态非常明确。随后，我们发现去甲自身抗原特异性CD8+T直通粒体催化在成效很慢的病症中所基本不存在，但在近来胃癌和长时间存在的哮喘病症中所很容易样品到。这可能指出，与成效病症相比于，这些病症自身免疫催化的调节加强。

早期数据归纳指出，尽管调节性T直通粒体(Treg)存量正常，但哮喘病症存在一些特性有缺陷，其中所除此以外对IL-2的催化能力下降。此外，哮喘病症中所的不稳定性CD4+T直通粒体可能对调节非常具抵抗性，展现为不稳定性T直通粒体的抑止逼近，自然现象转化成的Treg和体外转化成的抑制Treg，以及抗原经历的CD4+T直通粒体中所IL-2催化逼近。本数据归纳的目的是所述了CD4+调节性T直通粒体(Treg)在在在极很慢成效者中所的形态，他们的平均年岁为43岁(31-72岁)，随访间隔时间为18-32年。

方法：BOX数据归纳是一项以许多人为基础的纵向数据归纳，在21岁一般而言复发的病症亲族中所健康检查1型式哮喘的致命因素。我们以后所述了长时间很慢成效者的形态，他们保持多重去甲自身血清特征性超过10年，但不会注意到哮喘的临床研究病症，慢性或非完成性自身免疫。随后，10名继续保持无哮喘并愿意给予大量血液抽取的很慢成效者纳入T和B直通粒体特性归纳。在目前的数据归纳中所，8名慢成效者(SP第三组)，中所位年岁43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的去甲自身血清特征性。所有的与会者都保持稳定1型式哮喘成效的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身血清对某些抗原的特征性催化，然而，一名病症仍然保持稳定2期至较少6年，但不会注意到临床研究病症，一名病症被诊断为哮喘，该受试者72岁，在采集测试抽取时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳中所对该ADP完成了单独审计。分开外周血单个核直通粒体(PBMCs)，采用多参数流式直通粒体忍术和T直通粒体抑止试验审计ADP中所Treg的频所部、变异式和特性。可用FlowSOM和CITRUS(聚类深入研究、表征和紧接著)完成无全权负责聚类归纳，审计Treg变异式。

结果：与身心健康ADP相比于，来自慢成效体的梦境CD4+T直通粒体的全权负责聚类结果显示，激活的梦境CD4+ Treg频所部上升，与利尿剂抑制的TNFR无关蛋白(GITR)表达出来上升有关。一名HbA1c升高的病症与成效很慢者和给定的对照第三组相比于，Treg著者各有不同。特性归纳指出，与身心健康ADP相比于，来自很慢成效体的Treg酪氨酸的CD4+不稳定性T直通粒体抑止明显受损。展现为对不稳定性CD4+T直通粒体CD25和CD134表达出来的抑止上升。

示意图1 深入的变异式归纳结果显示，CD4+Treg非典型式在慢成效字段中所上升。由FlowSOM填充的Treg室，聚集在来自所有ADP的活CD4+CD45RA -直通粒体上。根据标示出物表达出来深入研究出10个元簇:梦境T直通粒体_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T直通粒体;HLA-DR + GITR +梦境T直通粒体;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)可用9个不同Treg标示出填充的10个元簇的MST。每个结点均是由一个集群(100个集群)，非常大的元集群(10个元集群)在结点第三组周围绘图。每个结点中所的碗示意图坚称单个标示出的表达出来最高级别。(b)每个元聚类的热示意图，以结果显示整体标示出表达出来。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)填充示意图，以及FlowSOM标识的每个元簇的较厚。(e-l)相比稀土元素为每个metacluster盒直通示意图(稀土元素> 0.05%)确切为HD和SP第三组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T直通粒体(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T直通粒体(l)。紫色橘色均是由**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 可用CITRUS的预测式证实，Treg频所部的上升是成效很慢的标识。分级依赖型(a - f)和柑橘归纳(g-k)比较SP与会者和给定的HD与会者在CD4+CD45RA−T直通粒体上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的均是由性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3硫化物，然后通过HLA-DR和GITR表达出来完成分开，三维FlowSOM社会阶层。(b) HD(黑点)和SP(黑纹)第三组以及ADPSP 606(紫色)中所CD25+ cd127的频所部核心内容示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型同构的盒直通示意图;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇锥形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来准确度着色，对角突出的簇被标识为SP和HD字段中间的不同。(j)盒直通示意图结果显示了在SP(黑纹)和HD(灰点)第三组中所，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相比稀土元素(比例)。(k)直方示意图结果显示每个簇的变异式(粉红色)和Treg标示出相比表达出来与时代背景表达出来(金色);上列，寄存器Treg_3;下面一行，寄存器Treg_4。时代背景与所有其他簇中所标示出的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩检验

示意图3 与身心健康献血者相比于，成效很慢者梦境treg的GITR上升。每个梦境CD4+T直通粒体元簇(梦境T直通粒体_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T直通粒体;HLA-DR + GITR +梦境T直通粒体;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个表达出来标示出的转变。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的表达出来热示意图(sp606不除此以外在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇中所所有HD(白色)、所有SP(金色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR表达出来结合，结果显示直方示意图(c)和核心内容示意图(d)。Wilcoxon配对记号秩和检验，p< 0.07(紫色)所有ADP除此以外，p< 0.05(金色)ADPSP 606和给定的HD不除此以外在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR表达出来，从分级依赖型，从所有HD(白色)、所有SP(金色)和SP 606(紫色)结合，结果显示直方示意图(e)和核心内容示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对记号秩检验

示意图4 来自很慢成效的CD4+ treg直通粒体控制不稳定性CD4+T直通粒体的能力下降。SP第三组用金色的直通和橘色坚称，HD第三组用黑色的直通和橘色坚称，紫色的直通/橘色坚称ADPsp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T直通粒体完成分选。CD4+CD25−(可不答者)被标示出为CFSE, Treg按观察的比例溶液。用抗CD3 /28微珠活化直通粒体，培育3同月完成流式直通粒体忍术样品。(a-d)与CD4+可不答者相比可不的treg培育(暂时性)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD可不答者培育。(a,b,f) CFSE抑制(a,e)和CFSE抑止一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止一般而言。可用特征性对照(激活的响可不直通粒体仅有treg)量化抑止一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 不稳定性CD4+T直通粒体对很慢成效的T直通粒体活化的抑止非常敏感。SP第三组用金色的直通和橘色坚称，HD第三组用黑色的直通和橘色坚称，紫色的直通/橘色坚称ADPsp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T直通粒体完成分选。CD4+CD25−(可不答者)被cfsel标示出，treg按观察的比例溶液。用抗CD3 /28微珠活化直通粒体，培育3同月完成流式直通粒体忍术(CD25反染)和直通粒体因叔父归纳。HD Treg与HD、SP或sp606可不答者共同培育。(a,b) CFSE抑制(a)和CFSE抑止百分所部(b)。(c,d) CD25抑止百分所部(c)和CD134抑止百分所部(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育中所的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

事实：我们断定的事实是，来自很慢成效叔父的活化梦境CD4+Treg在GITR表达出来中所给予了扩展和丰富，强调了促使数据归纳Treg在1型式哮喘效用幼体中所的异质性的必要。

标题中有：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28