Diabetologia：激活但功用受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现单单来肾脏自身蛋白质到显现单单来1型式白血病流行病学病症的成效百余人在孩童时期就有极好的揭示，多个肾脏自身蛋白质非典型的孩童当中亦有70%在血清反转后10年内患病白血病，而随访15年的孩童这一比重减低到84%。比起之下，占流行病学1型式白血病一半以上的型式1型式白血病的复发机制还没有人得不到必要的研究工作。

越来越多的人开始使用应于系统设计来定义1型式白血病的成效：个体在显现单单来多种肾脏自身蛋白质时进入第1阶段，显现单单来高血压异常时进入第2阶段，显现单单来病症时进入第3阶段。一些多发肾脏自身蛋白质非典型的个体，在1期和2期，成效极快，并发展为复发的1型式白血病。我们先前揭示了一小组在首次探测到多种肾脏自身蛋白质抽取后大概10年无白血病的极慢成效者，这小组高血压多人少，但特性非常明确。随后，我们发掘单单肾脏自身蛋白质特异性CD8+T巨噬细胞反不宜在成效极快的高血压当中基本不存在，但在早先复发和长期存在的白血病高血压当中很容易探测到。这可能表明，与成效高血压比起，这些高血压自身免疫反不宜的调节增强。

早期研究工作表明，尽管调节性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但白血病高血压存在一些功能缺陷，其当中仅限于对IL-2的反不宜战斗能力减缓。此外，白血病高血压当中的效不宜CD4+T巨噬细胞可能对调节非常具抵抗性，表现为效不宜T巨噬细胞的消除移向，自然归因于的Treg和体外归因于的其会Treg，以及蛋白质随之而来的CD4+T巨噬细胞当中IL-2反不宜移向。本研究工作的目的是揭示了CD4+调节性T巨噬细胞(Treg)在一个大极极快成效者当中的特性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群结合的斜向研究工作，在21岁表列单单确诊的高血压亲属当中检查1型式白血病的危险诱因。我们先前揭示了长期极快成效者的特性，他们保持良好多重肾脏自身蛋白质非典型最多10年，但没有人显现单单来白血病的流行病学病症，慢性或非同步性功能自身免疫。随后，10名在此期间保持良好无白血病并主动提供大量血液抽取的极快成效者纳入T和B巨噬细胞功能数据分析。在目前的研究工作当中，8名慢成效者(SP小组)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肾脏自身蛋白质非典型。所有的大多数人都正处于1型式白血病成效的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身蛋白质对某些蛋白质的非典型反不宜，然而，一名高血压已经正处于2期大概6年，但没有人显现单单来流行病学病症，一名高血压被诊断为白血病，该受试者72岁，在采集实验抽取时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析当中对该酪氨酸同步进行了单独审计。剥离外周血单个核子巨噬细胞(PBMCs)，选用多参数流式巨噬细胞术和T巨噬细胞消除试验车审计酪氨酸当中Treg的增益、表型式和功能。使用FlowSOM和CITRUS(聚类认定、密切相关和回归)同步进行无统筹聚类数据分析，审计Treg表型式。

结果：与有益酪氨酸比起，来自慢成效体的失忆CD4+T巨噬细胞的统筹聚类显示，激活的失忆CD4+ Treg增益减低，与组胺其会的TNFR相关蛋白(GITR)表示减低有关。一名HbA1c增大的高血压与成效极快者和冗余的对照小组比起，Treg五音略有不同。功能数据分析表明，与有益酪氨酸比起，来自极快成效体的Treg介导的CD4+效不宜T巨噬细胞消除轻微受损。表现为对效不宜CD4+T巨噬细胞CD25和CD134表示的消除减低。

布1 侧重的表型式数据分析显示，CD4+Treg亚型式在慢成效配置文件当中减低。由FlowSOM分解的Treg室，聚集在来自所有酪氨酸的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标示物表示认定单单10个元簇:失忆T巨噬细胞_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +失忆T巨噬细胞;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)使用9个不同Treg标示分解的10个元簇的MST。每个路由代表一个一个大(100个一个大)，非常大的元一个大(10个元一个大)在路由小组周围上色。每个路由当中的煎饼布暗示单个标示的表示级别。(b)每个元聚类的热布，以显示整体标示表示。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)分解布，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起同位素为每个metacluster罐中央线布(同位素> 0.05%)确定为HD和SP小组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T巨噬细胞(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T巨噬细胞(l)。绿色带次子代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon以此类推小写字母秩核子查。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 使用CITRUS的预测模型式证实，Treg增益的减低是成效极快的标志。分级门控(a - f)和柑橘数据分析(g-k)比较SP大多数人和冗余的HD大多数人在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)表型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的近现代布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR表示同步进行剥离，模拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(虎纹)小组以及酪氨酸SP 606(绿色)当中CD25+ cd127的增益汇总布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控邻域的罐中央线布;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表示强度着色，箭头突单单的簇被标识为SP和HD配置文件之间的不同。(j)罐中央线布显示了在SP(虎纹)和HD(灰点)小组当中，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的比起同位素(比重)。(k)直方布显示每个簇的表型式(粉红色)和Treg标示比起表示与背景表示(绿色);上列，缓存Treg_3;下面一行，缓存Treg_4。背景与所有其他簇当中标示的表示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon以此类推小写字母秩核子查

布3 与有益献血者比起，成效极快者失忆treg的GITR减低。每个失忆CD4+T巨噬细胞元簇(失忆T巨噬细胞_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +失忆T巨噬细胞;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个表示标示的改变。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的表示热布(sp606不仅限于在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(绿色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR表示串联，显示直方布(c)和汇总布(d)。Wilcoxon以此类推小写字母秩和核子查，p< 0.07(绿色)所有酪氨酸仅限于，p< 0.05(绿色)酪氨酸SP 606和冗余的HD不仅限于在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR表示，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(绿色)和SP 606(绿色)串联，显示直方布(e)和汇总布(f) *p< 0.05, Wilcoxon以此类推小写字母秩核子查

布4 来自极快成效的CD4+ treg巨噬细胞控制效不宜CD4+T巨噬细胞的战斗能力减缓。SP小组用绿色的中央线和带次子暗示，HD小组用金色的中央线和带次子暗示，绿色的中央线/带次子暗示酪氨酸sp606。使用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞同步进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被标示为CFSE, Treg按判读的比重滴定。用抗CD3 /28微珠再生巨噬细胞，培植3同一天同步进行流式巨噬细胞术探测。(a-d)与CD4+接收者者比起不宜的treg培植(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培植。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE消除比例(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除比例。使用非典型对照(激活的响不宜巨噬细胞不含treg)计算消除比例。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

布5 效不宜CD4+T巨噬细胞对极快成效的T巨噬细胞再生的消除非常敏感。SP小组用绿色的中央线和带次子暗示，HD小组用金色的中央线和带次子暗示，绿色的中央线/带次子暗示酪氨酸sp606。使用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞同步进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel标示，treg按判读的比重滴定。用抗CD3 /28微珠再生巨噬细胞，培植3同一天同步进行流式巨噬细胞术(CD25反染)和巨噬细胞因次子数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者一同培植。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE消除百分百余人(b)。(c,d) CD25消除百分百余人(c)和CD134消除百分百余人(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植当中的表示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得单单的结论是，来自极快成效次子的再生失忆CD4+Treg在GITR表示当中得不到了扩大和丰富，忽视了进一步研究工作Treg在1型式白血病风险个体当中的异质性的必要性。

原文单单处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28